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黃曲霉毒素M1(Ⅱ型)
詳細(xì)說明
【檢測步驟】 一、測定前須知: 1. 使用之前將所有試劑和所需板條回溫(20~25℃)。 2. 使用之后立即將所有試劑及剩余板條放置2~8℃。 3. ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA操作中的要點。 4. 在所有恒溫孵育過程中,避免光線照射,用蓋板膜封住微孔板。 二、操作步驟: 1. 將所需試劑及微孔板取出,放置室溫(20~25℃)30min以上,液體試劑使用前均須搖勻。 2. 取出所需數(shù)量的微孔板,將不用的微孔板與干燥劑一起重新真空密封,放置于2~8℃。不可冷凍。 3. 洗滌工作液在使用前也需回溫。 4. 將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。 5. 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本100μl到對應(yīng)的微孔中,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置室溫避光反應(yīng)30min。 6. 小心揭開蓋板膜,加入酶標(biāo)物50μl/孔,用蓋板膜蓋板后置室溫避光反應(yīng)5min。 7. 小心揭開蓋板膜,用洗滌工作液充分洗滌,300μl/孔,洗板5次,每次間隔30s,用吸水紙拍干。 8. 加入顯色液100μl/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置室溫避光反應(yīng)30min。 9. 加終止液50μl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)酶標(biāo)儀于450nm處讀取每孔OD值。 【結(jié)果判定】 1. 百分吸光率的計算 標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即 百分吸光率(%)= B/B0 ×100% B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0(ppb)標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值 2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算 以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ppb)的對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中黃曲霉毒素M1實際含量。 【注意事項】 1. 室溫低于20℃或試劑及樣本沒有恢復(fù)到室溫(20~25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。 2. 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。 3. 每種試劑使用前均需搖勻。 4. 反應(yīng)終止液為0.5M硫酸,避免接觸皮膚。 5. 不要使用過了有效期的試劑盒;也不要摻雜使用過了有效期的試劑盒;不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。 6. 儲存條件: 試劑盒保存于2~8℃,不能冷凍,將不用的微孔板重新真空密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的顯色劑對光敏感,因此要避光保存。 7. 試劑變質(zhì)的跡象: 顯色試劑有任何顏色表明顯色劑變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時,表示試劑可能變質(zhì)。 8. 加入顯色液后,一般顯色時間為15~30min。若顏色較淺,可延長反應(yīng)時間到35min(或更長),但不得超過40min。反之,則減短反應(yīng)時間。 9. 該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。 【樣品最低檢測限】 牛奶 ………………………………………………… 0.02ppb 奶粉 ………………………………………………… 0.1ppb 【貯藏條件及保存期】 貯藏條件:保存試劑盒于2~8℃。 保存期:該產(chǎn)品有效期為12個月 更多>本企業(yè)其它產(chǎn)品
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