GB/T 5009.33—1996 1 主題內(nèi)容與適用范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中亞硝酸鹽和硝酸鹽的測(cè)定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中亞硝酸鹽和硝酸鹽的測(cè)定。亞硝酸酸鹽方法檢出限為1 mg/kg，硝酸鹽方法檢出限為1.4 mg/kg。 第一篇 格里斯試劑比色法（第一法） （一）亞硝酸鹽測(cè)定 2 原理 樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，在弱酸條件下亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸重氮化后，再與N-1-萘基乙二胺偶合形成紫紅色染料，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。 3 試劑 實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水，試劑不加說(shuō)明者，均勻分析純?cè)噭?span style="color: rgb(51, 51, 51); font-family: 'PingFang SC', 'Lantinghei SC', 'Microsoft YaHei', arial, 宋體, sans-serif, tahoma; line-height: 24px;">。 3．1 氯化銨緩沖液：1 L容量瓶中加入500 mL水，準(zhǔn)確加入20.0 mL鹽酸，振蕩混勻，準(zhǔn)確加入50 mL氫氧化銨，用水稀釋至刻度。必要時(shí)用稀鹽酸和稀氫氧化銨調(diào)試至pH9.6～9.7。 3．2 硫酸鋅溶液（0.42 mol/L）：稱取120 g硫酸鋅（ZnSO4·7H2O），用水溶解，并稀釋至1 000 mL。 3．3 氫氧化鈉溶液（20 g/L）：稱取20 g氫氧化鈉用水溶解，稀釋至1 L。 3．4 對(duì)氨基苯磺酸溶液：稱取10 g對(duì)氨基苯磺酸，溶于700 mL水和300 mL冰乙酸中，置棕色瓶中混勻，室溫保存。 3．5 N-1-萘基乙二胺溶液（1 g/L）：稱取0.1 g N-1-萘基乙二胺，加60%乙酸溶解并稀釋至100 mL，混勻后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周內(nèi)穩(wěn)定。 3．6 顯色劑：臨用前將N-1-萘基乙二胺溶液（1 g/L）和對(duì)氨基苯磺酸溶液等體積混合。 3．7 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取250.0 mg于硅膠干燥器中干燥24 h的亞硝酸鈉，加水溶解移入500 mL容量瓶中，加100 mL氯化銨緩沖液，加水稀釋至刻度，混勻，在4℃避光保存。此溶液每毫升相當(dāng)于500 μg的亞硝酸鈉。 3．8 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液：臨用前，吸取亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00 mL，置于100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于5.0 μg亞硝酸鈉。 4 儀器 4．1 小型粉碎機(jī)。 4．2 分光光度計(jì)。 5 操作方法 5．1 樣品處理 稱取約10.00 g（糧食取5 g）經(jīng)絞碎混勻樣品，置于打碎機(jī)中，加70 mL 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部 1996—06—19 批準(zhǔn) 1996—09—01 實(shí)施 GB/T 5009.33—1996 水和12 mL氫氧化鈉溶液（20 g/L），混勻，用氫氧化鈉溶液（20 g/L）調(diào)樣品pH=8，定量轉(zhuǎn)移至200 mL容量瓶中加10 mL硫酸鋅溶液，混勻，如不產(chǎn)生白色沉淀，再補(bǔ)加2～5 mL氫氧化鈉，混勻。置60℃水浴中加熱10 min，取出后冷至室溫，加水至刻度，混勻。放置0.5 h，用濾紙過(guò)濾，棄去初濾液20 mL，收集濾液備用。 5．2 測(cè)定 5．2．1 亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：吸取0,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0.5.0 mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于0,2.5,5,10,15,20,25 μg亞硝酸鈉），分別置于25 mL帶塞比色管中。于標(biāo)準(zhǔn)管中分別加入4.5 mL氯化銨緩沖液，加2.5 mL60%乙酸后立即加入5.0 mL顯色劑，加水至刻度，混勻，在暗處?kù)o置25 min用1 cm比色杯（靈敏度低時(shí)可換2 cm比色杯），以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)550 nm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 低含量樣品以制備低含量標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)系列為：吸取0,0.4,0.8,1.2,1.6,2.0 mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于0,2,4,6,8,10 μg亞硝酸鈉）。 5．2．2 樣品測(cè)定：吸取10.0 mL上述濾液（5.1）于25 mL帶塞比色管中，自5.2.1“于標(biāo)準(zhǔn)管中分別加入4.5 mL氯化銨緩沖液”起依法操作。同時(shí)做試劑空白。 6 計(jì)算 1000100012121×××=VVmmX……………………………………（1） 式中：X1——樣品中亞硝酸鹽的含量，mg/kg； m1——樣品質(zhì)量，g；