當(dāng)光線通過一個渾濁介質(zhì)溶液時，由于溶液中存在混濁顆粒，光線被吸收一部分，吸收的多少與混濁便攜式防水溶解氧測定儀顆粒的量成正比，這種測定光吸收量的方法稱為透射比濁法。這一方法早于1959年schultre和schuick等報道應(yīng)用于血漿蛋白與其抗體結(jié)合后形成復(fù)合物，導(dǎo)致濁度的改變，再進行透射比濁測定，一般采用抗體對抗原定量的透射比濁法，稱為免疫透射比濁法。其原理是，利用抗原和抗體的特異性結(jié)合形成復(fù)合物，通過測定復(fù)合物形成量的多少對抗原或抗體進行定量的方法。在介質(zhì)溶液中，抗原與特異性抗體在一定條件下才能形成復(fù)合物，一定的條件包括：①對抗體的要求，作為體液或組織中蛋白質(zhì)種類很多，若要快速特異檢測，要求有單價特異抗體才能與抗原形成復(fù)合物。某一種蛋白質(zhì)，有其特異抗體才能與該抗原結(jié)合，形成免疫復(fù)合物進行定量，若抗體不純混雜有另一種或兩種少量的抗體，這種免疫復(fù)合物就不是單一復(fù)合物而是大雜燴，結(jié)果偏高；②抗原抗體比例適當(dāng)，因免疫復(fù)合物形成有三個階段，第一階段是復(fù)合物形成抗原抗體復(fù)合物；第二階段是初步形成抗原抗體復(fù)合物，此階段是復(fù)合物交聯(lián)成大的網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu)；第三階段是復(fù)合物聚合產(chǎn)生絮狀沉淀。只有在抗原與抗體等價時即無過剩抗體，此時，復(fù)合物的結(jié)合與解離處于平衡狀態(tài)，其混濁程度達高峰。在抗體過量時，隨抗原量的增加而復(fù)合物形成也增加，其測定只能在反應(yīng)曲線的左側(cè)進行（見圖18-4）；③一般要求溶液中有非離子性親水多聚體促進免疫復(fù)合物的形成，如聚二乙醇6000等。溶液ph為6.5～8.0之間為宜。載脂蛋白有形成兩性螺旋片（amphipathic helix）的特性，對脂質(zhì)（特別是磷脂）有高度親和力，與脂質(zhì)結(jié)合后有時會掩蓋抗原位點或構(gòu)象改變，可以部分或完全喪失對抗血清的特異反應(yīng)。為此，載脂蛋白檢測過程中有必要先暴露抗原位點，所用試劑有表面活性劑，尿素，鹽酸胍和吐溫等解離蛋白劑，或用四甲基脲脫脂或有機溶劑脫脂等暴露抗原決定簇等方法，血清脂蛋白顆粒中的載脂蛋白，能在短時間內(nèi)形成抗原抗體復(fù)合物進行定量；④抗原不能過量，因為抗原過量，抗原抗體復(fù)合物形成不但不增加，反而會減少，光散射或光吸收減少，檢測結(jié)果反而偏低當(dāng)光線通過一個渾濁介質(zhì)溶液時，由于溶液中存在混濁顆粒，光線被吸收一部分，吸收的多少與混濁顆粒的量成正比，這種測定光吸收量的方法稱為透射比濁法。這一方法早于1959年schultre和schuick等報道應(yīng)用于血漿蛋白與其抗體結(jié)合后形成復(fù)合物，導(dǎo)致濁度的改變，再進行透射比濁測定，一般采用抗體對抗原定量的透射比濁法，稱為免疫透射比濁法。其原理是，利用抗原和抗體的特異性結(jié)合形成復(fù)合物，通過測定復(fù)合物形成量的多少對抗原或抗體進行定量的方法。在介質(zhì)溶液中，抗原與特異性抗體在一定條件下才能形成復(fù)合物，一定的條件包括：①對抗體的要求，作為體液或組織中蛋白質(zhì)種類很多，若要快速特異檢測，要求有單價特異抗體才能與抗原形成復(fù)合物。某一種蛋白質(zhì)，有其特異抗體才能與該抗原結(jié)合，形成免疫復(fù)合物進行定量，若抗體不純混雜有另一種或兩種少量的抗體，這種免疫復(fù)合物就不是單一復(fù)合物而是大雜燴，結(jié)果偏高；②抗原抗體比例適當(dāng)，因免疫復(fù)合物形成有三個階段，第一階段是復(fù)合物形成抗原抗體復(fù)合物；第二階段是初步形成抗原抗體復(fù)合物，此階段是復(fù)合物交聯(lián)成大的網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu)；第三階段是復(fù)合物聚合產(chǎn)生絮狀沉淀。只有在抗原與抗體等價時即無過剩抗體，此時，復(fù)合物的結(jié)合與解離處于平衡狀態(tài)，其混濁程度達高峰。在抗體過量時，隨抗原量的增加而復(fù)合物形成也增加，其測定只能在反應(yīng)曲線的左側(cè)進行（見圖18-4）；③一般要求溶液中有非離子性親水多聚體促進免疫復(fù)合物的形成，如聚二乙醇6000等。溶液ph為6.5～8.0之間為宜。載脂蛋白有形成兩性螺旋片（amphipathic helix）的特性，對脂質(zhì)（特別是磷脂）有高度親和力，與脂質(zhì)結(jié)合后有時會掩蓋抗原位點或構(gòu)象改變，可以部分或完全喪失對抗血清的特異反應(yīng)。為此，載脂蛋白檢測過程中有必要先暴露抗原位點，所用試劑有表面活性劑，尿素，鹽酸胍和吐溫等解離蛋白劑濁度儀，或用四甲基脲脫脂或有機溶劑脫脂等暴露抗原決定簇等方法，血清脂蛋白顆粒中的載脂蛋白，能在短時間內(nèi)形成抗原抗體復(fù)合物進行定量；④抗原不能過量，因為抗原過量，抗原抗體復(fù)合物形成不但不增加，反而會減少，光散射或光吸收減少，檢測結(jié)果反而偏低當(dāng)光線通過一個渾濁介質(zhì)溶液時，由于溶液中存在混濁顆粒，光線被吸收一部分，吸收的多少與混濁顆粒的量成正比，這種測定光吸收量的方法稱為透射比濁法。這一方法早于1959年schultre和schuick等報道應(yīng)用于血漿蛋白與其抗體結(jié)合后形成復(fù)合物，導(dǎo)致濁度的改變，再進行透射比濁測定，一般采用抗體對抗原定量的透射比濁法，稱為免疫透射比濁法。其原理是，利用抗原和抗體的特異性結(jié)合形成復(fù)合物，通過測定復(fù)合物形成量的多少對抗原或抗體進行定量的方法。在介質(zhì)溶液中，抗原與特異性抗體在一定條件下才能形成復(fù)合物，一定的條件包括：①對抗體的要求，作為體液或組織中蛋白質(zhì)種類很多，若要快速特異檢測，要求有單價特異抗體才能與抗原形成復(fù)合物。某一種蛋白質(zhì)，有其特異抗體才能與該抗原結(jié)合，形成免疫復(fù)合物進行定量，若抗體不純混雜有另一種或兩種少量的抗體，這種免疫復(fù)合物就不是單一復(fù)合物而是大雜燴，結(jié)果偏高；②抗原抗體比例適當(dāng)，因免疫復(fù)合物形成有三個階段，第一階段是復(fù)合物形成抗原抗體復(fù)合物；第二階段是初步形成抗原抗體復(fù)合物，此階段是復(fù)合物交聯(lián)成大的網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu)；第三階段是復(fù)合物聚合產(chǎn)生絮狀沉淀。只有在抗原與抗體等價時即無過剩抗體，此時，復(fù)合物的結(jié)合與解離處于平衡狀態(tài)，其混濁程度達高峰。在抗體過量時，隨抗原量的增加而復(fù)合物形成也增加，其測定只能在反應(yīng)曲線的左側(cè)進行（見圖18-4）；③一般要求溶液中有非離子性親水多聚體促進免疫復(fù)合物的形成，如聚二乙醇6000等。溶液ph為6.5～8.0之間為宜。載脂蛋白有形成兩性螺旋片（amphipathic helix）的特性，對脂質(zhì)（特別是磷脂）有高度親和力，與脂質(zhì)結(jié)合后有時會掩蓋抗原位點或構(gòu)象改變，可以部分或完全喪失對抗血清的特異反應(yīng)。為此，載脂蛋白檢測過程中有必要先暴露抗原位點，所用試劑有表面活性劑，尿素，鹽酸胍和吐溫等解離蛋白劑，或用四甲基脲脫脂或有機溶劑脫脂等暴露抗原決定簇等方法，血清脂蛋白顆粒中的載脂蛋白，能在短時間內(nèi)形成抗原抗體復(fù)合物進行定量；④抗原不能過量，因為抗原過量，抗原抗體復(fù)合物形成不但不增加，反而會減少，光散射或光吸收減少，檢測結(jié)果反而偏低