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分光光度計在醫學領域主要應用于那些方面

?? 2021-07-03 15270
核心提示:分光光度計在醫學領域主要應用于:核酸的定量、蛋白質的直接定量(UV法)、比色法蛋白質定量。1、核酸的定量核酸的定量是分光光

分光光度計在醫學領域主要應用于:核酸的定量、蛋白質的直接定量(UV法)、比色法蛋白質定量。

1、核酸的定量

核酸的定量是分光光度計使用頻率最高的功能。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應的系數。如

2、蛋白質的直接定量(UV法)

這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。選擇Warburg 公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質。

3、比色法蛋白質定量

蛋白質通常是多種蛋白質的混合物,比色法測定的基礎是蛋白質構成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應,產生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關,從而反應蛋白質濃度。

擴展資料

分光光度計測量范圍一般包括波長范圍為380~780 nm的可見光區和波長范圍為200~380 nm的紫外光區。不同的光源都有其特有的發射光譜,因此可采用不同的發光體作為儀器的光源。

鎢燈的發射光譜:鎢燈光源所發出的380~780nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后,可得到由紅、橙、黃、綠、藍、靛、紫組成的連續色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源。

參考資料來源:百度百科——分光光度計

上海君曦為你解答:
1. 測定溶液中物質的含量
可見或紫外分光光度法都可用于測定溶液中物質的含量。測定標準溶液(濃度已知的溶液)和未知液(濃度待測定的溶液)的吸光度,進行比較,由于所用吸收池的厚度是一樣的。也可以先測出不同濃度的標準液的吸光度,繪制標準曲線,在選定的濃度范圍內標準曲線應該是一條直線,然后測定出未知液的吸光度,即可從標準曲線上查到其相對應的光度計濃度。含量 測定時所用波長通常要選擇被測物質的最大吸收波長,這樣做有兩個好處:(1)靈敏度大,物質在含量上的稍許變化將引起較大的吸光度差異;(2)可以避免其他物質的干擾。
2.用紫外光譜鑒定化合物
使用分光光度計可以繪制吸收光譜曲線。方法是用各種波長不同的單色光分別通過某一濃度的溶液,測定此溶液對每一種單色光的吸光度,然后以波長為橫座標,以吸光度為縱座標繪制吸光度一波長曲線,此曲線即吸收光譜曲線。各種物質有它自己一定的吸收光譜曲線,因此用吸收光譜曲線圖可以進行物質種類的鑒定。一定物質在不同濃度時,其吸收光譜曲線 中,峰值的大小不同,但形狀相似,即吸收高峰和低峰的波長是一定不變的。紫外線吸收是由不飽和的結構造成的,含有雙鍵的化合物表現出吸收峰。紫外吸收光譜比較簡單,同一種物質的紫外吸收光譜應完全一致,但具有相同吸收光譜的化合物其結構不一定相同。除了特殊情況外,單獨依靠紫外吸收光譜決定一個未知物結構,必須與其他方法配合。紫外吸收光譜分析主要用于已知物質的定量分析和純度分析。
3.比較最大吸收波長吸收系數的一致性 由于紫外吸收光譜只含有2~3個較寬的吸收帶,而紫外光譜主要是分子內的發色團在紫外區產生的吸收,與分子和其它部分關系不大。具有相同發色團的不同分子結構,在較大分子中不影響發色團的紫外吸收光譜,不同的分子結構有可能有相同的紫外吸收光譜,但它們的吸收系數是有差別的。如果分析樣品和標準樣品的吸收波長相同,吸收系數也相同,則可認 為分析樣品與標準樣品為同一物質。
4.反應動力學研究
借助于分光光度法可以得出一些化學反應速度常數,并從兩個或兩個以上溫度條件下得到的速度數據,得出反應活化能。
5.純度檢驗
紫外吸收光譜能測定化合物中含有微量的具有紫外吸收的雜質。如果化合物的紫外可見光區沒有明顯的吸收峰,而它的雜質在紫外區內有較強的吸收峰,就可以檢測出化合物中的雜質。
6.氫鍵強度的測定
不同的極性溶劑產生氫鍵的強度也不同,這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度,以確定選擇哪一種溶劑。
7.絡合物組成及穩定常數的測定 金屬離子常與有機物形成絡合物,多數絡合物在紫外可見區是有吸收的,我們可以利用分光光度法來研究其組成。上海君曦為你解答:1. 測定溶液中物質的含量 可見或紫外分光光度法都可用于測定溶液中物質的含量。測定標準溶液(濃度已知的溶液)和未知液(濃度待測定的溶液)的吸光度,進行比較,由于所用吸收池的厚度是一樣的。也可以先測出不同濃度的標準液的吸光度,繪制標準曲線,在選定的濃度范圍內標準曲線應該是一條直線,然后測定出未知液的吸光度,即可從標準曲線上查到其相對應的濃度。含量 測定時所用波長通常要選擇被測物質的最大吸收波長,這樣做有兩個好處:(1)靈敏度大,物質在含量上的稍許變化將引起較大的吸光度差異;(2)可以避免其他物質的干擾。 2.用紫外光譜鑒定化合物 使用分光光度計可以繪制吸收光譜曲線。方法是用各種波長不同的單色光分別通過某一濃度的溶液,測定此溶液對每一種單色光的吸光度,然后以波長為橫座標,以吸光度為縱座標繪制吸光度一波長曲線,此曲線即吸收光譜曲線。各種物質有它自己一定的吸收光譜曲線,因此用吸收光譜曲線圖可以進行物質種類的鑒定。一定物質在不同濃度時,其吸收光譜曲線 中,峰值的大小不同,但形狀相似,即吸收高峰和低峰的波長是一定不變的。紫外線吸收是由不飽和的結構造成的,含有雙鍵的化合物表現出吸收峰。紫外吸收光譜比較簡單,同一種物質的紫外吸收光譜應完全一致,但具有相同吸收光譜的化合物其結構不一定相同。除了特殊情況外,單獨依靠紫外吸收光譜決定一個未知物結構,必須與其他方法配合。紫外吸收光譜分析主要用于已知物質的定量分析和純度分析。 3.比較最大吸收波長吸收系數的一致性 由于紫外吸收光譜只含有2~3個較寬的吸收帶,而紫外光譜主要是分子內的發色團在紫外區產生的吸收,與分子和其它部分關系不大。具有相同發色團的不同分子結構,在較大分子中不影響發色團的紫外吸收光譜,不同的分子結構有可能有相同的紫外吸收光譜,但它們的吸收系數是有差別的。如果分析樣品和標準樣品的吸收波長相同,吸收系數也相同,則可認 為分析樣品與標準樣品為同一物質。 4.反應動力學研究 借助于分光光度法可以得出一些化學反應速度常數,并從兩個或兩個以上溫度條件下得到的速度數據,得出反應活化能。 5.純度檢驗 紫外吸收光譜能測定化合物中含有微量的具有紫外吸收的雜質。如果化合物的紫外可見光區沒有明顯的吸收峰,而它的雜質在紫外區內有較強的吸收峰,就可以檢測出化合物中的雜質。 6.氫鍵強度的測定 不同的極性溶劑產生氫鍵的強度也不同,這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵多參數水質檢測儀強度,以確定選擇哪一種溶劑。 7.絡合物組成及穩定常數的測定 金屬離子常與有機物形成絡合物,多數絡合物在紫外可見區是有吸收的,我們可以利用分光光度法來研究其組成。

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