第一步，知道你所需要測量物質的特征吸收波長是多少？這個可以在國家標準、行業標準或其他相關標準或方法。例如測量總氮的話，就需要220和275nm這2個波長，所以必須買紫外的光度計，并且最好帶雙波長測定功能，例如測總磷是697nm，只需買臺可見光度計就可以了。
第二步，知道所測量的物質的實驗方法，需要哪些儀器和設備，還有玻璃器皿等，同時還有比較完成測量所需要的所有化學試劑等。這個可以在標準或實驗方法中找到，基本在互聯網上都可以找到電子版的測量方法。
第三步，配置好所需測量物質的標準濃度溶液，一般是5-8個標準溶液，濃度建議從高到低，建議每個不同濃度貼上標簽，以防順序搞錯。注意，部分實驗需要往標準溶液中加顯色劑之后才可以用光度計進行測量。
第四步，設置好光度計的測量波長，這就需要熟悉光度計的基本操作，一般測量物質的濃度都是用的標準曲線法，就是對應光度計中的定量測量功能。具體操作時第一步，把儀器的波長調整到我們所需要的波長，例如測量總磷直接把波長走到697nm，之后放入裝好蒸餾水的比色皿到樣品室做空白，就是熟稱的調零。第三部把標準溶液放入樣品室，依次測量他們的吸光度，儀器一般會自動記錄之后就會給出標準曲線方程，實驗完畢。如果儀器不能直接記錄吸光度，可以先記在筆記本上，之后用excel軟件進行計算標準曲線。判斷做出的標準曲線是否能用，看哪個R值即那個相關系數，一般最少做出0.999就可以用了，差一點的儀器也可以做出0.99.
第五步，把未知樣品放入樣品室就可以直接測量出樣品濃度。不知道你舊測什么樣的樣品？不同的樣品會有不的方法

用分光光度計測定質粒DNA的濃度

一、目的
熟練掌握分光光度法檢測DNA純度和濃度的方法。
二、原理
DNA或RNA鏈上堿基的苯環結構在紫光區具有較強吸收，其吸收峰在260nm處。波長為260nm時，DNA或RNA的光密度OD260不僅與總含量有關，也隨構型而有差異。對標準樣品來說，濃度為1μg / ml時，DNA鈉鹽的OD260＝0.02當OD260＝1時，
dsDNA濃度約為50μg / ml
ssDNA濃度約為37μg / ml
RNA濃度約為40μg / ml
寡核苷酸濃度約為30μg / ml（youyu底物不同有差異）

當DNA樣品中含有蛋白質、酚或其他小分子污染物時，會影響DNA吸光度的準確測定。一般情況下同時檢測同一樣品的OD260、OD280和OD230，計算其比值來衡量樣品的純度。
經驗值：
純DNA：OD260/OD280≈1.8(＞1.9,表明有RNA污染；＜1。6，表明有蛋白質、酚等污染）
純RNA：1.7 ＜OD260/OD280＜2.0（＜1.7時表明有蛋白質或酚污染；＞2.0時表明可能有異硫氰酸殘存）
若樣品不純，則比值發生變化，此時無法用分光光度法對核酸進行定量，可使用方案二的方法或其他方法進行估算。
三、材料、試劑及器具
1、 材料
提取的PUC19樣品、PUC19標準樣品
2、 試劑
滅菌重蒸水，TE緩沖液
3、 器皿
石英比色皿；UV-240紫外分光光度計

四、操作步驟
1、 UV-240紫外分光光度計開機預熱10min.
2、 用重蒸水洗滌比色皿，吸水紙吸干，加入TE緩沖液后，放入樣品室的S池架上，關上蓋板。
3、 設定狹縫后校零。
4、 將標準樣品和待測樣品適當稀釋（DNA5μl或RNA4μl用TE緩沖液稀釋至1000μl）后，記
錄編號和稀釋度。
5、 把裝有標準樣品或待測樣品的比色皿放進樣品室的S架上，關閉蓋板。
6、 設定紫外光波長，分別測定230nm、260nm、280nm波長時的OD值。
7、 計算待測樣品的濃度微電腦總硬度(CaCO 3)濃度測定儀與純度。
DNA樣品的濃度（μg / μl）:OD260×稀釋倍數×50/1000
RNA樣品的濃度（μg / μl）：OD260×稀釋倍數×40/1000

752型紫外可見分光光度計
操作規程

目的：建立紫外可見分光光度計操作規程，確保其使用安全、正確。
范圍：適用于752型紫外可見分光光度計。
操作規程：
1. 打開儀器開關，儀器使用前應預熱30分鐘。
2. 轉動波長旋鈕，觀察波長顯示窗，調整至需要的測量波長。
3. 根據測量波長，撥動光源切換桿，手動切換光源。200-339nm使用氘燈，切換桿撥至紫外區；340nm-1000nm使用鹵鎢燈，切換桿撥至可見區。
4. 調T零
在透視比（T）模式，將遮光體放入樣品架，合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路。按下“調0%”鍵，屏幕上顯示“000.0”或“-000.0”時，調T零完成。
5.調100%T/ OA
先用參比（空白）溶液蕩洗比色皿2-3次，將參比（空白）溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路。按下“調100%”鍵，屏幕上顯示“BL”延時數秒便出現“100.0”（T模式）或“000.0”、“-000.0”（A模式）。調100%T/ OA完成。
6.測量吸光度
6.1 參照操作步驟3、步驟4。
6.2 在吸光度（A）模式，參照步驟5調100%T/ OA。
6.3 用待測溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路，讀取測量數據。
7.測量透視比
7.1 參照操作步驟3、步驟4。
7.2 在透視比（T）模式，參照步驟5調100%T/ OA。
7.3用待測溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路，讀取測量數據。
8.濃度測量
8.1 參照操作步驟3、步驟4。
8.2 在透視比（T）模式，參照步驟5調100%T/ OA。
8.3用標準濃度溶液蕩洗比色皿2-3次，將標準濃度溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路。
8.4 按下“功能鍵”切換至濃度（C）模式。
8.5 按下“▲”或“▼”鍵，設置標準溶液濃度，并按下“確認”鍵。
8.6 用待測溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路，讀取測量數據。
9.斜率測量
9.1 參照操作步驟3、步驟4。
9.2 在透視比（T）模式，參照步驟5調100%T/ OA。
9.3 按下“功能鍵”切換至斜率（F）模式。
9.4 按下“▲”或“▼”鍵，設置樣品斜率。
9.5 用待測溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路，按下“確認”鍵（此時儀器自動切換至濃度（C）模式），讀取測量數據。
10. 測量完畢
10.1 測量完畢后，清理樣品室，將比色皿清洗干凈，倒置晾干后收起。
10.2 關閉電源，蓋好防塵罩，結束試驗。

注意事項：
1、調100%T/ OA后，儀器應穩定5分鐘再進行測量。
2、光源選擇不正確或光源切換桿不到位，將直接影響儀器的穩定性。
3、比色皿應配對使用，不得混用。置入樣品架時，石英比色皿上端的“Q”標記（或箭頭）、玻璃比色皿上端的“G”標記方向應一致。
4、玻璃比色皿適用范圍：320nm~1100nm，石英比色皿適用范圍：200nm~1100nm。不知道你舊測什么樣的樣品？不同的樣品會有不的方法用分光光度計測定質粒DNA的濃度一、目的熟練掌握分光光度法檢測DNA純度和濃度的方法。二、原理DNA或RNA鏈上堿基的苯環結構在紫光區具有較強吸收，其吸收峰在260nm處。波長為260nm時，DNA或RNA的光密度OD260不僅與總含量有關，也隨構型而有差異。對標準樣品來說，濃度為1μg / ml時，DNA鈉鹽的OD260＝0.02當OD260＝1時， dsDNA濃度約為50μg / ml ssDNA濃度約為37μg / ml RNA濃度約為40μg / ml 寡核苷酸濃度約為30μg / ml（youyu底物不同有差異）當DNA樣品中含有蛋白質、酚或其他小分子污染物時，會影響DNA吸光度的準確測定。一般情況下同時檢測同一樣品的OD260、OD280和OD230，計算其比值來衡量樣品的純度。經驗值：純DNA：OD260/OD280≈1.8(＞1.9,表明有RNA污染；＜1。6，表明有蛋白質、酚等污染） 純RNA：1.7 ＜OD260/OD280＜2.0（＜1.7時表明有蛋白質或酚污染；＞2.0時表明可能有異硫氰酸殘存）若樣品不純，則比值發生變化，此時無法用分光光度法對核酸進行定量，可使用方案二的方法或其他方法進行估算。 三、材料、試劑及器具1、 材料提取的PUC19樣品、PUC19標準樣品2、 試劑滅菌重蒸水，TE緩沖液3、 器皿石英比色皿；UV-240紫外分光光度計四、操作步驟1、 UV-240紫外分光光度計開機預熱10min.2、 用重蒸水洗滌比色皿，吸水紙吸干，加入TE緩沖液后，放入樣品室的S池架上，關上蓋板。3、 設定狹縫后校零。4、 將標準樣品和待測樣品適當稀釋（DNA5μl或RNA4μl用TE緩沖液稀釋至1000μl）后，記 錄編號和稀釋度。5、 把裝有標準樣品或待測樣品的比色皿放進樣品室的S架上，關閉蓋板。6、 設定紫外光波長，分別測定230nm、260nm、280nm波長時的OD值。7、 計算待測樣品的濃度與純度。DNA樣品的濃度（μg / μl）:OD260×稀釋倍數×50/1000RNA樣品的濃度（μg / μl）：OD260×稀釋倍數×40/1000 752型紫外可見分光光度計操作規程目的：建立紫外可見分光光度計操作規程，確保其使用安全、正確。范圍：適用于752型紫外可見分光光度計。操作規程：1. 打開儀器開關，儀器使用前應預熱30分鐘。2. 轉動波長旋鈕，觀察波長顯示窗，調整至需要的測量波長。3. 根據測量波長，撥動光源切換桿，手動切換光源。200-339nm使用氘燈，切換桿撥至紫外區；340nm-1000nm使用鹵鎢燈，切換桿撥至可見區。4. 調T零在透視比（T）模式，將遮光體放入樣品架，合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路。按下“調0%”鍵，屏幕上顯示“000.0”或“-000.0”時，調T零完成。5.調100%T/ OA先用參比（空白）溶液蕩洗比色皿2-3次，將參比（空白）溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路。按下“調100%”鍵，屏幕上顯示“BL”延時數秒便出現“100.0”（T模式）或“000.0”、“-000.0”（A模式）。調100%T/ OA完成。6.測量吸光度6.1 參照操作步驟3、步驟4。6.2 在吸光度（A）模式，參照步驟5調100%T/ OA。6.3 用待測溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路，讀取測量數據。7.測量透視比7.1 參照操作步驟3、步驟4。7.2 在透視比（T）模式，參照步驟5調100%T/ OA。7.3用待測溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路，讀取測量數據。8.濃度測量8.1 參照操作步驟3、步驟4。8.2 在透視比（T）模式，參照步驟5調100%T/ OA。8.3用標準濃度溶液蕩洗比色皿2-3次，將標準濃度溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路。8.4 按下“功能鍵”切換至濃度（C）模式。8.5 按下“▲”或“▼”鍵，設置標準溶液濃度，并按下“確認”鍵。8.6 用待測溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路，讀取測量數據。9.斜率測量9.1 參照操作步驟3、步驟4。9.2 在透視比（T）模式，參照步驟5調100%T/ OA。9.3 按下“功能鍵”切換至斜率（F）模式。9.4 按下“▲”或“▼”鍵，設置樣品斜率。9.5 用待測溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動樣品架拉桿使其進入光路，按下“確認”鍵（此時儀器自動切換至濃度（C）模式），讀取測量數據。10. 測量完畢10.1 測量完畢后，清理樣品室，將比色皿清洗干凈，倒置晾干后收起。10.2 關閉電源，蓋好防塵罩，結束試驗。注意事項：1、調100%T/ OA后，儀器應穩定5分鐘再進行測量。2、光源選擇不正確或光源切換桿不到位，將直接影響儀器的穩定性。3、比色皿應配對使用，不得混用。置入樣品架時，石英比色皿上端的“Q”標記（或箭頭）、玻璃比色皿上端的“G”標記方向應一致。4、玻璃比色皿適用范圍：320nm~1100nm，石英比色皿適用范圍：200nm~1100nm。