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紫外分光光度計給核酸定量的原理

?? 2021-07-10 15280
核心提示:分光光度計計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長的光源,光源透過測試的樣品后,部分光源被吸
分光光度計HI801 計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長的光源,光源透過測試的樣品后,部分光源被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一,因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應(yīng)的系數(shù)。如:1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDN多參數(shù)水質(zhì)檢測儀A,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算,從而得出相應(yīng)的樣品濃度YSI-Pro20i。測試前,選擇正確的程序,輸入原液和稀釋液的體積,爾后測試空白液和樣品液基本原理
分子的紫外可見吸收光譜是由于分子 中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后,發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。它是帶狀光譜,反映了分子中某些基團的信息,可以用標(biāo)準(zhǔn)光譜圖再結(jié)合其它手段進行定性分析。
朗伯-比爾定律:當(dāng)一束平行單色光通過含有吸光物質(zhì)的稀溶液時,溶液的吸光度與吸光物質(zhì)濃度、液層厚度乘積成正比,即 A= kcl
式中比例常數(shù)k與吸光物質(zhì)的本性,入射光波長及溫度等因素有關(guān)。c為吸光物質(zhì)濃度,l為透光液層厚度。基本原理 分子的紫外可見吸收光譜是由于分子 中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后,發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。它是帶狀光譜,反映了分子中某些基團的信息,可以用標(biāo)準(zhǔn)光譜圖再結(jié)合其它手段進行定性分析。 朗伯-比爾定律:當(dāng)一束平行單色光通過含有吸光物質(zhì)的稀溶液時,溶液的吸光度與吸光物質(zhì)濃度、液層厚度乘積成正比,即 A= kcl 式中比例常數(shù)k與吸光物質(zhì)的本性,入射光波長及溫度等因素有關(guān)HI98128 。c為吸光物質(zhì)濃度,l為透光液層厚度。

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