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    菌落總數是指樣品經過處理，在一定條件下培養后所得1 mL（g）檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數，是最常用的微生物檢測項目。菌落總數檢測板是一種預先制備好的一次性培養基產品，含有標準的營養培養基，吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在檢測板上呈紅色，這樣可縮短計數時間和增強計數效果。本產品適合于各類食品及食品原料中菌落總數的測定。執行標準：《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定》（GB 4789.2）。

2、操作方法

2.1  樣品處理：取樣品 25 mL（g）放入含有225 mL滅菌磷酸緩沖稀釋液（或生理鹽水）的取樣罐或均質袋內，制成1:10的樣品勻液，必要時用1 mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液調節樣品勻液pH至6.6～7.2。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1 mL，注入含有9 mL稀釋液的試管內，振搖后成為1:100的樣品勻液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。

2.2  接種：一般食品選2～3個稀釋度進行檢測，含菌量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直接吸取原液進行檢測。將菌落總數檢測板置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1 mL樣品勻液滴加到檢測板內，迅速貼好上層膜并水平晃動檢測板，讓樣品勻液均勻吸附在濾紙上，靜置10s左右，待樣品勻液完全被吸附在濾紙上。每個稀釋度接種兩片。同時做一片空白陰性對照。

2.3  培養：將檢測板疊在一起，倒置于恒溫培養箱內。一般食品培養溫度為36℃±1℃，培養15～24 h；水產品培養溫度為30℃±1℃，培養48 h。

3、結果判讀

     細菌在檢測板上生長后會顯示紅色斑點，選擇菌落數適中（30～300 CFU）的檢測板進行計數，乘以稀釋倍數后即為每毫升（或每克）樣品中所含的細菌菌落總數。

4、計數原則及報告方式

4.1  若只有一個稀釋度檢測板上的菌落數在適宜計數范圍內，計算兩個檢測板菌落數的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數，作為每克（或毫升）樣品中菌落總數結果。

4.2  若有兩個連續稀釋度的檢測板菌落數在適宜計數范圍內時，按式(1)計算: 

                                ················ （1）

    式中：

    N——樣品中菌落數；

    ∑C——檢測板上(含適宜范圍菌落數的測試片)菌落數之和；

    n1——第一稀釋度（低稀釋倍數）檢測板數；

    n2——第二稀釋度（高稀釋倍數）檢測板數；

d——稀釋因子(第一稀釋度)。

示例：

上述數據經“四舍五入”后，表示25000或2.5×104。

4.3  若所有的稀釋度菌落總數均大于300 CFU，則對稀釋度最高的檢測板進行計數，其他檢測板可記錄為多不可計，結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。

4.4  若所有的稀釋度菌落總數均小于30 CFU，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。

4.5 若所有的稀釋度（包括液體樣品原液）均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數計算。

4.6  若所有稀釋度的平均菌落數均不在30 CFU～300 CFU之間，其中一部分小于30 CFU或大于300CFU，則以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。

4.7 菌落總數的報告

4.7.1 菌落總數在100 CFU以內時，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數字報告。

4.7.2 大于或等于100 CFU時，第三位數字采用“四舍五入”原則修約后，取前兩位數字，后面的0代替位數，也可用指數形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數字。

4.7.3 若測試片上一片紅色無法計數時，則報告多不可計。

4.7.4 若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結果無效。

4.7.5 固體樣品以CFU/g為單位報告，液體樣品以CFU/mL為單位報告。

5、附加說明

5.1  菌落總數檢測板檢測結果與傳統平板計數瓊脂平板法符合率可達90％以上。

5.2  磷酸緩沖液稀釋液的配制與滅菌：貯存液：稱取34.0 g分析純磷酸二氫鉀（KH2PO4）溶于500 mL蒸餾水或純凈水中，用大約175 mL的1 mol/L氫氧化鈉（NaOH）溶液調節PH至7.2，用蒸餾水稀釋至1000 mL后貯存于冰箱。稀釋液：取貯存液1.25 mL，用蒸餾水稀釋至1000 mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15 min，或放入消毒碗柜中消毒。

5.3 生理鹽水的配制與滅菌：取8.5 g分析純氯化鈉（NaCl）溶解到1000 mL蒸餾水或純凈水中，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15 min，或放入消毒碗柜中消毒。

5.4 注意使用過的檢測板上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理。